ഡൈനാമിക് ബയോസെൻസറുകൾ വൈ-സ്ട്രക്ചർ അമിൻ കപ്ലിംഗ് കിറ്റ് 1

പ്രധാന സവിശേഷതകൾ

• പുതിയ Y-ഘടന ലിഗാൻഡ് സ്ട്രാൻഡ് 1 - റെഡ് എന്നതിലേക്ക് പ്രാഥമിക അമിനുകളുമായി (ഉദാ: NH2-ടെർമിനസ്, ലൈസിനുകൾ) ജൈവതന്മാത്രകളെ ബന്ധിപ്പിക്കാൻ അനുവദിക്കുന്നു.
• സൗകര്യപ്രദമായ സ്റ്റാൻഡേർഡ് കെമിസ്ട്രി (NHS കെമിസ്ട്രി).
• heliX® അഡാപ്റ്റർ ചിപ്പുമായി പൊരുത്തപ്പെടുന്നു.
• ശുദ്ധമായ ലിഗാൻഡ്-ഡിഎൻഎ കൺജഗേറ്റുകൾക്ക് (> 5 kDa) proFIRE® ശുദ്ധീകരണത്തിന് അനുയോജ്യമാണ്.
• ഒന്നിലധികം ലിഗാൻഡുകളുടെ സംയോജനം ഒരേസമയം നടത്താം.
• വിളവ് > 95% ശുദ്ധമായ ലിഗാൻഡ്-ഡിഎൻഎ ഉപയോക്തൃ നിർണ്ണയിച്ച അന്തിമ ഉൽപ്പന്നത്തിൻ്റെ ഗുണനിലവാരവുമായി സംയോജിക്കുന്നു.
• മൂന്ന് വ്യക്തിഗത സംയോജന പ്രതിപ്രവർത്തനങ്ങൾക്കുള്ള റിയാജന്റുകൾ ഉൾപ്പെടുന്നു (ഏകദേശം 10-50 പുനരുജ്ജീവനങ്ങൾ വീതം; പരമാവധി 500 വരെ).
• ഓട്ടോമേറ്റഡ് സ്റ്റാൻഡേർഡ് റീജനറേഷൻ പ്രക്രിയയുമായി പൊരുത്തപ്പെടുന്നു.

വർക്ക്ഫ്ലോ കഴിഞ്ഞുview

3-ഘട്ട സംയോജന വർക്ക്ഫ്ലോ

ടൈംലൈൻ: കൃത്യസമയത്ത് കൈകൾ < 1 മണിക്കൂർ | ഇൻകുബേഷൻ ~ 2 മണിക്കൂർ | ആകെ ~ 3 മണിക്കൂർ

ഉൽപ്പന്ന വിവരണം

ഓർഡർ നമ്പർ: HK-NYS-NHS-1
പട്ടിക 1. ഉള്ളടക്കവും സംഭരണ ​​വിവരങ്ങളും

മെറ്റീരിയൽ	തൊപ്പി	തുക	സംഭരണം
Y-ഘടന ലിഗൻഡ് സ്ട്രാൻഡ് 1 എൻഎച്ച്എസ്	നീല	3 x	-20 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസ്
ബഫർ എ [1]	സുതാര്യം	1 x 1.8 മി.ലി	-20 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസ്
ബഫർ സി [2]	സുതാര്യം	3 x 1.8 മി.ലി	-20 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസ്
ബഫർ PE40 [3]	സുതാര്യം	3 x 1.5 മി.ലി	-20 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസ്
ddH2O	സുതാര്യം	1.5 മി.ലി	-20 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസ്
ക്രോസ്ലിങ്കർ	ബ്രൗൺ	3 x	-20 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസ്
ശുദ്ധീകരണ സ്പിൻ കോളം	ചുവപ്പ്	6 x	2-8 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസ്
ശുദ്ധീകരണ സ്പിൻ കോളത്തിനുള്ള 2.0 മില്ലി പ്രതികരണ ട്യൂബുകൾ		6 x	RT
അപകേന്ദ്ര ഫിൽട്ടർ യൂണിറ്റ് (3 kDa MWCO)[4]		3 x	RT
സെൻട്രിഫ്യൂഗേഷൻ ശേഖരണ ട്യൂബ്		3 x	RT

ഗവേഷണ ഉപയോഗത്തിന് മാത്രം.
ഈ ഉൽപ്പന്നത്തിന് പരിമിതമായ ഷെൽഫ് ലൈഫ് ഉണ്ട്, ദയവായി കാലഹരണ തീയതി ലേബലിൽ കാണുക.

പ്രധാനപ്പെട്ടത്
ഉൽപ്പന്നങ്ങൾ വ്യത്യസ്‌ത ഊഷ്മാവിൽ അയയ്‌ക്കാം, പക്ഷേ സംഭരണം പട്ടികയിൽ പറഞ്ഞിരിക്കുന്ന മാർഗ്ഗനിർദ്ദേശങ്ങൾ പാലിക്കണം.
ഏകദേശം 50-200 μg ബയോമോളിക്യൂളിൻ്റെ അഞ്ച് സംയോജനങ്ങൾക്ക് ആവശ്യമായ റിയാഗൻ്റുകൾ കിറ്റിൽ അടങ്ങിയിരിക്കുന്നു.
ശുദ്ധീകരണ സ്പിൻ നിരയിലെ റെസിൻ സ്ലറിയിൽ 0.02 % സോഡിയം അസൈഡ് അടങ്ങിയിരിക്കുന്നു.

ആവശ്യമായ അധിക സാമഗ്രികൾ

പട്ടിക 2. അധിക സാമഗ്രികൾ

മെറ്റീരിയൽ	അഭിപ്രായങ്ങൾ
ബെഞ്ച്ടോപ്പ് മൈക്രോസെൻട്രിഫ്യൂജ്	ആവശ്യമായ വേഗത പരിധി 1,000 xg മുതൽ 13,000 xg വരെ
ചുഴി
1.5 മില്ലി പ്രതികരണ ട്യൂബുകൾ
യുവി-വിസ് സ്പെക്ട്രോഫോട്ടോമീറ്റർ (ഉദാ: നാനോഡ്രോപ്പ്)	നിർണ്ണയത്തിനായി ലിഗൻഡ് സ്ട്രാൻഡ് 1 സംയോജനത്തിൻ്റെ ഏകാഗ്രത

ആവശ്യമായ എല്ലാ പരിഹാരങ്ങളും ബഫറുകളും കിറ്റിൽ ഉൾപ്പെടുത്തിയിട്ടുണ്ട്.

പ്രധാനപ്പെട്ട പൊതു കുറിപ്പുകൾ

• എ. ലയോഫിലൈസ് ചെയ്ത ലിഗാൻഡ് സ്ട്രാൻഡ് എല്ലായ്പ്പോഴും ട്യൂബിൻ്റെ അടിയിൽ കാണണമെന്നില്ല; അത് ട്യൂബ് ഭിത്തിയിലോ ട്യൂബ് തൊപ്പിയിലോ നിലനിൽക്കും. വ്യക്തമായ പെല്ലറ്റ് രൂപഭാവത്താൽ തിരിച്ചറിയാൻ കഴിയുന്ന, ലയോഫിലൈസ് ചെയ്ത ലിഗാൻഡ് സ്‌ട്രാൻഡിൻ്റെ സാന്നിധ്യം എപ്പോഴും പരിശോധിക്കുക (അത് കാണുന്നതിന് നിങ്ങൾ ട്യൂബ് ലേബൽ നീക്കം ചെയ്യേണ്ടതായി വന്നേക്കാം). ഇത് അടിയിലല്ലെങ്കിൽ, ഡിഎൻഎയെ ബഫറിൽ ലയിപ്പിക്കുന്നതിന് മുമ്പ് രണ്ട് മിനിറ്റ് നേരത്തേക്ക് ഉയർന്ന വേഗതയിൽ ട്യൂബ് സെൻട്രിഫ്യൂജ് ചെയ്യുക. പകരമായി, നിങ്ങളുടെ പൈപ്പറ്റിൻ്റെ അറ്റം ഡിഎൻഎ പെല്ലറ്റിന് സമീപം വയ്ക്കുകയും ബഫർ അതിലേക്ക് നേരിട്ട് വിതരണം ചെയ്യുകയും ചെയ്യുക; ഡിഎൻഎ പെട്ടെന്ന് അലിഞ്ഞു ചേരും.
• b. ക്രോസ്‌ലിങ്കർ ലിഗാൻഡിന്റെ പ്രാഥമിക അമിൻ ഗ്രൂപ്പുകളുമായി (-NH2) ബന്ധിപ്പിക്കപ്പെടും. ഓരോ പോളിപെപ്റ്റൈഡ് ശൃംഖലയുടെയും N-അറ്റത്തും ലൈസിൻ അമിനോ ആസിഡ് അവശിഷ്ടങ്ങളുടെ സൈഡ് ചെയിനിലും പ്രാഥമിക അമിനുകൾ നിലനിൽക്കുന്നു.
• സി. സംയോജന പ്രക്രിയയിൽ പ്രൈമറി അമിനുകൾ (അതായത് ട്രിസ്, ഗ്ലൈസിൻ) അടങ്ങിയ ഏതെങ്കിലും ബഫറുകൾ ഉപയോഗിക്കുന്നത് ഒഴിവാക്കുക (ദയവായി കോംപാറ്റിബിലിറ്റി ഷീറ്റ് വിഭാഗം പരിശോധിക്കുക).
• ഡി. സംയോജന പ്രക്രിയയിൽ 1 mM വരെ Dithiothreitol (DTT) ഉപയോഗിക്കാം. സംയോജന പ്രക്രിയയിൽ 2-Mercaptoethanol അല്ലെങ്കിൽ മറ്റേതെങ്കിലും തയോൾ അടിസ്ഥാനമാക്കിയുള്ള കുറയ്ക്കുന്ന ഏജൻ്റുകൾ ഉപയോഗിക്കുന്നത് ഒഴിവാക്കുക. ഒരു കുറയ്ക്കൽ ഏജൻ്റ് ആവശ്യമാണെങ്കിൽ, TCEP 1 mM വരെ ശുപാർശ ചെയ്യുന്നു.
• ഇ. ഭാഗികമായി ശുദ്ധീകരിച്ച പ്രോട്ടീൻ ഉപയോഗിക്കുന്നത് ഒഴിവാക്കുകampലെസ് അല്ലെങ്കിൽ പ്രോട്ടീൻ എസ്ampകാരിയറുകൾ അടങ്ങിയ ലെസ് (ഉദാ ബിഎസ്എ).
• എഫ്. ഉയർന്ന പ്രതികരണ ഫലം ഉറപ്പാക്കാൻ, ലിഗാൻഡ് ബഫർ സിയിൽ ലയിപ്പിക്കണം. സംയോജന പ്രക്രിയയ്ക്ക് മുമ്പ് ബഫർ എക്സ്ചേഞ്ച് ശുപാർശ ചെയ്യുന്നു.
• ജി. ആരംഭിക്കുന്നതിന് മുമ്പ്, എല്ലാ വസ്തുക്കളും ട്യൂബുകളുടെ അടിയിലാണെന്ന് ഉറപ്പാക്കാൻ നീല, തവിട്ട്, സുതാര്യമായ തൊപ്പികൾ ഉപയോഗിച്ച് എല്ലാ ട്യൂബുകളും ഹ്രസ്വമായി സെൻട്രിഫ്യൂജ് ചെയ്യുക.
• h. 5 kDa-യ്ക്ക് ചുറ്റും അല്ലെങ്കിൽ അതിൽ താഴെ തന്മാത്രാ ഭാരം ഉള്ള തന്മാത്രകൾക്ക്, ശുദ്ധീകരണ പ്രക്രിയയിൽ അധിക ജാഗ്രത ആവശ്യമാണ്. നൽകിയിരിക്കുന്ന ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫിക് കോളം ഉപയോഗിച്ച് ചെറിയ തന്മാത്രകളും ചില പെപ്റ്റൈഡുകളും ശരിയായി ശുദ്ധീകരിക്കപ്പെട്ടേക്കില്ല. കൂടുതൽ വിവരങ്ങൾക്ക് support.dbs@bruker.com എന്ന വിലാസത്തിൽ ഇമെയിൽ ചെയ്യുക.
• ഐ. പ്രോട്ടീൻ്റെ pI < 6 ആണെങ്കിൽ, സംയോജനത്തിനുള്ള കുറഞ്ഞ pH കിറ്റ് (ഓർഡർ നമ്പർ: HK-NHS-3) ശുപാർശ ചെയ്യുന്നു. കൂടുതൽ വിവരങ്ങൾക്ക്, ദയവായി ഇമെയിൽ ചെയ്യുക support.dbs@bruker.com.

ഒരു ജൈവതന്മാത്രയെ ലിഗാൻഡ് സ്ട്രാൻഡ് 1-ലേക്ക് 3-ഘട്ട സംയോജനം

ആരംഭിക്കുന്നതിന് മുമ്പ് ദയവായി മുഴുവൻ പ്രോട്ടോക്കോളും വായിച്ച് എല്ലാ ഘട്ടങ്ങളും തടസ്സമില്ലാതെ നടപ്പിലാക്കുക.

ടിപ്പ്

ഒന്നിലധികം കപ്ലിംഗ് പ്രതികരണങ്ങൾക്കായി ഈ പ്രോട്ടോക്കോൾ ഒരേസമയം നടപ്പിലാക്കാൻ കഴിയും.
ഭാഗികമായി ശുദ്ധീകരിച്ച പ്രോട്ടീൻ ഉപയോഗിക്കുന്നത് ഒഴിവാക്കുകampലെസ് അല്ലെങ്കിൽ പ്രോട്ടീൻ എസ്ampകാരിയറുകൾ അടങ്ങിയ ലെസ് (ഉദാ, ബിഎസ്എ).
ആരംഭിക്കുന്നതിന് മുമ്പ്, ക്രോസ്ലിങ്കർ ഉപയോഗിക്കുന്നതിന് മുമ്പ് മുറിയിലെ താപനിലയിൽ എത്താൻ അനുവദിക്കുക.
ഇനി മുതൽ, Y-സ്ട്രക്ചർ ലിഗാൻഡ് സ്ട്രാൻഡ് 1 NHS നെ ലിഗാൻഡ് സ്ട്രാൻഡ് 1 എന്ന് വിളിക്കും.

നാനോലെവർ പരിഷ്ക്കരണം

1. ഉപയോഗിക്കുന്നതിന് മുമ്പ് 40 µL ബഫർ എയിൽ ലിഗാൻഡ് സ്ട്രാൻഡ് 1 ലയിപ്പിക്കുക, എല്ലാ ഖരവസ്തുക്കളും പൂർണ്ണമായും അലിഞ്ഞുപോകുന്നതുവരെ വോർട്ടക്സ് ചെയ്ത് ഹ്രസ്വമായി താഴേക്ക് കറങ്ങുക.
2. 100 µL ddH2O ചേർത്ത് ക്രോസ്ലിങ്കർ (തവിട്ട് തൊപ്പി) ലയിപ്പിക്കുക, എല്ലാ ഖരവസ്തുക്കളും പൂർണ്ണമായും അലിഞ്ഞുപോകുന്നതുവരെ വോർട്ടക്സ് ചെയ്യുക, തുടർന്ന് ഹ്രസ്വമായി താഴേക്ക് കറങ്ങുക. പ്രധാനം: എല്ലായ്പ്പോഴും പുതിയ സംയുക്തം ഉപയോഗിക്കുക.
3. പുതുതായി തയ്യാറാക്കിയ ലിങ്കർ ലായനിയിൽ നിന്ന് 10 µL ഒരു ലിഗാൻഡ് സ്ട്രാൻഡ് 1 അലിക്വോട്ടിലേക്ക് ചേർക്കുക. ഘട്ടം 2 മുതൽ ശേഷിക്കുന്ന ലിങ്കർ ലായനി ഉപേക്ഷിക്കുക.
4. 10 സെക്കൻഡ് നേരത്തേക്ക് റിയാക്‌ടൻ്റുകളെ വോർടെക്‌സ് ചെയ്യുക, താഴേക്ക് കറങ്ങുക, ഊഷ്മാവിൽ 20 മിനിറ്റ് ഇൻകുബേറ്റ് ചെയ്യുക.
   പ്രധാനപ്പെട്ടത് ഇൻകുബേഷൻ സമയം കവിയരുത് അല്ലെങ്കിൽ പ്രതികരണ വിളവ് കുറയും.
5. അതിനിടയിൽ, ഒരു കപ്ലിംഗ് പ്രതികരണത്തിനായി രണ്ട് ശുദ്ധീകരണ സ്പിൻ നിരകൾ (ചുവന്ന തൊപ്പി) സമനിലയിലാക്കുക:
   • എ. നിരയുടെ താഴെയുള്ള സീൽ നീക്കം ചെയ്ത് തൊപ്പി അഴിക്കുക (തൊപ്പി നീക്കം ചെയ്യരുത്).
   • ബി. 2.0 മില്ലി റിയാക്ഷൻ ട്യൂബിൽ കോളം വയ്ക്കുക.
   • c. സംഭരണ ​​ലായനി നീക്കം ചെയ്യുന്നതിനായി 1,500 xg എന്ന അളവിൽ 1 മിനിറ്റ് സെൻട്രിഫ്യൂജ് ഉപയോഗിക്കുക.
   • d. കോളത്തിന്റെ റെസിൻ ബെഡിലേക്ക് 400 µL ബഫർ സി ചേർക്കുക. ബഫർ നീക്കം ചെയ്യാൻ 1,500 xg-ൽ 1 മിനിറ്റ് സെൻട്രിഫ്യൂജ് ഉപയോഗിക്കുക.
   • ഇ. സ്റ്റെപ്പ് d ആവർത്തിച്ച് പ്രതികരണ ട്യൂബിൽ നിന്ന് തത്ഫലമായുണ്ടാകുന്ന ബഫർ നിരസിക്കുക. ശുദ്ധീകരണ സ്പിൻ കോളം ഇപ്പോൾ വരണ്ട അവസ്ഥയിലായിരിക്കണം.
6. Sample ലോഡിംഗ്
   • എ. പുതിയ 5 മില്ലി റിയാക്ഷൻ ട്യൂബുകളിൽ ഘട്ടം 1.5 മുതൽ നിരകൾ സ്ഥാപിക്കുക.
   • ബി. സ്പിൻ കോളം നമ്പർ 1 ൻ്റെ തൊപ്പി നീക്കം ചെയ്‌ത് s പ്രയോഗിക്കുകampലെ സ്റ്റെപ്പ് 4 മുതൽ റെസിൻ ബെഡിൻ്റെ മുകളിലേക്ക്.
   • c. 1,500 xg യിൽ 2 മിനിറ്റ് നേരത്തേക്ക് സെൻട്രിഫ്യൂജ് ഉപയോഗിച്ച് s ശേഖരിക്കുക.ample (ഫ്ലോ-ത്രൂ). ഉപയോഗത്തിന് ശേഷം പ്യൂരിഫിക്കേഷൻ സ്പിൻ കോളം ഉപേക്ഷിക്കുക.
   • ഡി. സ്പിൻ കോളം നമ്പർ 2 ൻ്റെ തൊപ്പി നീക്കം ചെയ്ത് s പ്രയോഗിക്കുകampലെ സ്റ്റെപ്പ് സി മുതൽ റെസിൻ ബെഡ് വരെ.
   • ഇ. 1,500 xg യിൽ 2 മിനിറ്റ് നേരത്തേക്ക് സെൻട്രിഫ്യൂജ് ഉപയോഗിച്ച് с ശേഖരിക്കുക.ample (ഫ്ലോ-ത്രൂ). ഉപയോഗത്തിന് ശേഷം പ്യൂരിഫിക്കേഷൻ സ്പിൻ കോളം ഉപേക്ഷിക്കുക.

ലിഗൻഡ് സംയോജനം

1. ഏകദേശം ചേർക്കുക. 100 µg (പരമാവധി 200 µg വരെ) ലിഗാൻഡ് (ഏകദേശം 0.5 – 50 mg/mL) ലേക്ക്ampഘട്ടം 6 മുതൽ le. ഒപ്റ്റിമൽ അവസ്ഥകൾക്കായി ഏകദേശം ഒരു വോളിയം ഉപയോഗിക്കുക. 50 µL.
   EXAMPLE: പ്രോട്ടീൻ സാന്ദ്രത 2 mg/mL ആയി ക്രമീകരിക്കുകയും സംയോജനത്തിനായി 50 µL ഉപയോഗിക്കുക.
   പ്രധാനപ്പെട്ടത് ലിഗാൻഡിൻ്റെ സ്റ്റോറേജ് ബഫറിൽ പ്രാഥമിക അമിനുകളൊന്നും അടങ്ങിയിട്ടില്ലെന്ന് ഉറപ്പാക്കുക, ഉദാ: ട്രിസ് ബഫറുകൾ, ഗ്ലൈസിൻ (ദയവായി പ്രധാന കുറിപ്പുകൾ പരിശോധിക്കുക).
2. മുകളിലേക്കും താഴേക്കും പൈപ്പ് ചെയ്തുകൊണ്ട് പ്രതികരണം മിക്സ് ചെയ്യുക, കുറഞ്ഞത് 1 മണിക്കൂറെങ്കിലും ഊഷ്മാവിൽ പ്രതികരിക്കാൻ അനുവദിക്കുക.
   പ്രധാനപ്പെട്ടത് കറങ്ങരുത്. ആവശ്യമെങ്കിൽ, പ്രതികരണം 4 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിൽ ദൈർഘ്യമേറിയ പ്രതികരണ സമയം (ഉദാഹരണത്തിന് ഒറ്റരാത്രികൊണ്ട്) നടത്താം.

proFIRE® ശുദ്ധീകരണം

1. ഉചിതമായ proFIRE® വർക്ക്ഫ്ലോ ഉപയോഗിച്ച് ഒരു ശുദ്ധീകരണം നടത്തുക (ദയവായി proFIRE® ഉപയോക്തൃ മാനുവൽ കാണുക). എസ്ampലീ വോളിയം 160 µL ആണ്.
   1. എ. വോളിയം 160 µL-ൽ കുറവാണെങ്കിൽ, നഷ്ടപ്പെട്ട വോളിയം ബഫർ എ ഉപയോഗിച്ച് പൂരിപ്പിക്കുക.
      ബി. വോളിയം 160 µL കവിയുന്നുവെങ്കിൽ, എല്ലാ സെഷനുകളും വരെ ദയവായി 160 µL റണ്ണുകൾ നടത്തുക.ample കഴിക്കുന്നു.
   2. ഡാറ്റ ഉപയോഗിക്കുക Viewഏത് ഭിന്നസംഖ്യകളിൽ ശുദ്ധമായ സംയോജനം അടങ്ങിയിരിക്കുന്നുവെന്ന് തിരിച്ചറിയാൻ proFIRE®-ൻ്റെ സോഫ്റ്റ്വെയർ.
      ഒരു മുൻample ക്രോമാറ്റോഗ്രാം അധിക വിവര വിഭാഗത്തിൽ കാണിച്ചിരിക്കുന്നു: ലിഗാൻഡ് സ്ട്രാൻഡ് 1 കൺജഗേറ്റിന്റെ proFIRE® ശുദ്ധീകരണം.
   3. ഫ്രാക്ഷൻ കളക്ടറിൽ നിന്ന് ശുപാർശ ചെയ്യുന്ന ഭിന്നസംഖ്യകൾ നീക്കം ചെയ്യുക.

ടിപ്പ്

Ligand strand 1 conjugate proFIRE® റണ്ണിംഗ് ബഫറിൽ ദീർഘനേരം സൂക്ഷിക്കരുത്. ബഫർ എക്സ്ചേഞ്ചുമായി ഉടൻ മുന്നോട്ട് പോകുക.

ബഫർ എക്സ്ചേഞ്ച്

1. ലിഗാൻഡ് സ്ട്രാൻഡ് 1 കൺജഗേറ്റ് അടങ്ങിയ ആദ്യത്തെ proFIRE® ഫ്രാക്ഷന്റെ 500 µL സെൻട്രിഫ്യൂഗൽ ഫിൽട്ടർ യൂണിറ്റിലേക്ക് ചേർക്കുക. 13,000 xg (14,000 xg വരെ) യിൽ 10 മിനിറ്റ് സെൻട്രിഫ്യൂജ് ചെയ്ത് ഫ്ലോ-ത്രൂ ഉപേക്ഷിക്കുക.
2. ബാക്കിയുള്ള ഭിന്നസംഖ്യകൾ അതേ ഫിൽട്ടർ യൂണിറ്റിലേക്ക് ചേർക്കുകയും എല്ലാ സെഷനുകളും ശേഖരിക്കുന്നതിന് സെൻട്രിഫ്യൂഗേഷൻ ഘട്ടം ആവർത്തിക്കുകampഒരു ട്യൂബിൽ ലെസ്. (ദയവായി കൂടുതൽ വിവരങ്ങൾ പരിശോധിക്കുക: ബഫർ എക്സ്ചേഞ്ചും സെൻട്രിഫ്യൂഗൽ ഫിൽട്ടർ യൂണിറ്റുകളുമായുള്ള ഏകാഗ്രതയും).
3. 13,000 xg യിൽ 10 മിനിറ്റ് നേരത്തേക്ക് 350 µL PE40 (അല്ലെങ്കിൽ TE40, HE40) ബഫറും സെൻട്രിഫ്യൂജും ചേർക്കുക. ഫ്ലോ-ത്രൂ ഉപേക്ഷിക്കുക.
   പ്രധാനപ്പെട്ടത് PE40 (അല്ലെങ്കിൽ TE40, HE40)-ൽ പ്രോട്ടീൻ സ്ഥിരതയുള്ളതല്ലെങ്കിൽ, സ്വിച്ച്SENSE® അനുയോജ്യതാ ഷീറ്റിനൊപ്പം ബഫർ അനുയോജ്യത പരിശോധിക്കുക.
4. 13,000 xg യിൽ 15 മിനിറ്റ് നേരത്തേക്ക് 350 µL PE40 (അല്ലെങ്കിൽ TE40, HE40) ബഫറും സെൻട്രിഫ്യൂജും ചേർക്കുക. ഫ്ലോ-ത്രൂ ഉപേക്ഷിക്കുക.
5. ലിഗാൻഡ് സ്ട്രാൻഡ് 1 കൺജഗേറ്റ് വീണ്ടെടുക്കാൻ, സെൻട്രിഫ്യൂഗൽ ഫിൽട്ടർ യൂണിറ്റ് ഒരു പുതിയ സെൻട്രിഫ്യൂഗൽ കളക്ഷൻ ട്യൂബിൽ (കിറ്റിൽ നൽകിയിരിക്കുന്നത്) തലകീഴായി വയ്ക്കുക.
   s കൈമാറാൻ 1,000 xg യിൽ 2 മിനിറ്റ് സ്പിൻ ചെയ്യുകampട്യൂബിലേക്ക് le.

അലിക്കോട്ടുകളും സംഭരണവും

1. 260 nm-ൽ ലിഗാൻഡ് സ്ട്രാൻഡ് 1 കൺജഗേറ്റിന്റെ ആഗിരണം അളക്കുക. UV-Vis സ്പെക്ട്രോഫോട്ടോമീറ്ററിൽ (ഉദാ: നാനോഡ്രോപ്പ്).
2. ലിഗാൻഡ് സ്ട്രാൻഡ് 1 കൺജഗേറ്റിന്റെ (c1) സാന്ദ്രത, ചേർത്ത് നിർണ്ണയിക്കുക. ഇനിപ്പറയുന്ന സമവാക്യത്തിലേക്ക്:ഇവിടെ d എന്നത് പാതയുടെ നീളമാണ് (സാധാരണയായി 1 സെന്റിമീറ്ററിന് തുല്യമാണ്; എന്നിരുന്നാലും, ദയവായി UV-Vis സ്പെക്ട്രോഫോട്ടോമീറ്റർ ഉപയോക്തൃ മാനുവൽ പരിശോധിക്കുക) കൂടാതെ  260 nm-ൽ DNA-യുടെ എക്‌സ്റ്റിൻഷൻ കോഫിഫിഷ്യന്റ് ആണ്, ഇത് 272,000 ന് തുല്യമാണ്.
3. ഒരു ബയോചിപ്പ് ഫംഗ്‌ഷണലൈസേഷനായി ഉപയോഗിക്കാൻ തയ്യാറുള്ള പരിഹാരത്തിനായി, PE500 (അല്ലെങ്കിൽ TE1, HE40) ബഫർ (ആവശ്യമെങ്കിൽ 40 % വരെ ഗ്ലിസറോൾ ഉൾപ്പെടെ) ഉപയോഗിച്ച് കോൺസൺട്രേഷൻ 40 nM (അല്ലെങ്കിൽ 10 µM വരെ) ക്രമീകരിച്ച് 20 µL അലിക്കോട്ടുകൾ തയ്യാറാക്കുക. .
4. ഇഷ്ടാനുസരണം -86 °C നും 8 °C നും ഇടയിൽ സംഭരിക്കുക.
   ലായനിയുടെ സ്ഥിരത ലിഗാൻഡ് തന്മാത്രയുടെ സ്ഥിരതയുമായി ബന്ധപ്പെട്ടിരിക്കുന്നു.
   പ്രധാനപ്പെട്ടത് ഒരു switchSENSE® ഇൻ്ററാക്ഷൻ അളക്കുന്നതിന് മുമ്പ്, ദയവായി അനുയോജ്യമായ അഡാപ്റ്റർ സ്‌ട്രാൻഡ് സംയോജിത പരിഹാരത്തിലേക്ക് ചേർക്കുക.

അധിക വിവരം

ലിഗാൻഡ് സ്ട്രാൻഡ് 1 കൺജഗേറ്റിന്റെ proFIRE® ശുദ്ധീകരണം

1. ഒരു അളവെടുപ്പിൽ നിന്നുള്ള മികച്ച ഫലങ്ങൾ ഉറപ്പാക്കാൻ, ചിപ്പിൽ സൗജന്യ ലിഗൻഡ് സ്ട്രാൻഡ് 1 ഉണ്ടാകരുത്. അതിനാൽ, അസംസ്‌കൃത ലിഗാൻഡ് സ്‌ട്രാൻഡ് 1 സംയോജനങ്ങൾ അളക്കുന്നതിന് മുമ്പ് അയോൺ എക്‌സ്‌ചേഞ്ച് ക്രോമാറ്റോഗ്രഫി ഉപയോഗിച്ച് ശുദ്ധീകരിക്കണം. ഈ ഗുണനിലവാര നിയന്ത്രണ ഘട്ടം നിങ്ങളുടെ കളെ കുറിച്ചുള്ള കൂടുതൽ ഉപയോഗപ്രദമായ വിവരങ്ങൾ നൽകുന്നുample പരിശുദ്ധി.
2. ബഫർ എ [1] ഉം ബഫർ ബി [5] ഉം ആയ അയോൺ എക്സ്ചേഞ്ച് കോളം സജ്ജീകരിച്ചിരിക്കുന്ന proFIRE® സിസ്റ്റം ഉപയോഗിക്കാൻ ഞങ്ങൾ ശുപാർശ ചെയ്യുന്നു, ഇവയ്ക്ക് ഒരേ ഘടനയുണ്ട്, പക്ഷേ വ്യത്യസ്ത ഉപ്പ് സാന്ദ്രതയുണ്ട്, ഇത് പീക്ക് വേർതിരിക്കൽ അനുവദിക്കുന്നു.
   പ്രധാനപ്പെട്ടത് Y-സ്ട്രക്ചർ ലിഗാൻഡ് സ്ട്രാൻഡ് 1 - NHS കിറ്റിനായി, ശുദ്ധീകരണ പരിപാടി ആരംഭിക്കുമ്പോൾ ദയവായി DNA നീളം (ടൈപ്പ് 1) ആയി 24 നൽകുക.
   ചിത്രം 1-ൽ ഒരു ലിഗാൻഡ് സ്ട്രാൻഡ് 1 കൺജഗേറ്റ് ശുദ്ധീകരണത്തിന്റെ ഒരു സാധാരണ proFIRE® ക്രോമാറ്റോഗ്രാം ചിത്രീകരിച്ചിരിക്കുന്നു, അവിടെ പ്രോട്ടീൻ-ഡിഎൻഎ കൺജഗേറ്റിന്റെ പീക്ക് സ്വതന്ത്ര പ്രോട്ടീനിൽ നിന്നും (ഇടത്) സ്വതന്ത്ര ഡിഎൻഎയിൽ നിന്നും (വലത്) വേർതിരിക്കപ്പെടുന്നു.
   പ്രധാനപ്പെട്ടത്: DNA കൺജഗേറ്റുകളുടെ യാന്ത്രിക തിരിച്ചറിയലിനും അളവ് നിർണ്ണയിക്കലിനും വേണ്ടി പ്രത്യേകം രൂപകൽപ്പന ചെയ്ത ഒരു സോഫ്റ്റ്‌വെയർ proFIRE® സിസ്റ്റത്തിന്റെ കൈവശമുണ്ട്.
3. ശുദ്ധീകരണത്തിന് ശേഷം, ലിഗാൻഡ് സ്ട്രാൻഡ് 1 സംയോജിത ഭിന്നസംഖ്യകൾ (ചിത്രം 1: ഭിന്നസംഖ്യകൾ 8-10) ശേഖരിക്കുക, സംയോജനം കേന്ദ്രീകരിക്കുക, സെക്ഷൻ II-ൽ വിവരിച്ചിരിക്കുന്നതുപോലെ, ഒരു സെൻട്രിഫ്യൂഗൽ ഫിൽട്ടർ യൂണിറ്റ് ഉപയോഗിച്ച് നിങ്ങൾക്ക് ഇഷ്ടമുള്ള ബഫറുമായി ബഫർ മാറ്റുക.ചിത്രം 1. ഒരു ലിഗാൻഡ് സ്ട്രാൻഡ് കൺജഗേറ്റ് ശുദ്ധീകരണത്തിന്റെ proFIRE® ക്രോമാറ്റോഗ്രാം. ഉപയോഗിച്ച ബഫറുകൾ: ബഫർ A [1]; ബഫർ B [5].
   കോളം: proFIRE® കോളം. ഫ്ലോ: 1 mL/മിനിറ്റ്. ഉപയോഗിച്ച പ്രോഗ്രാം: DNA ദൈർഘ്യം 24, തരം 1.

സെൻട്രിഫ്യൂഗൽ ഫിൽട്ടർ യൂണിറ്റുകളുമായുള്ള ബഫർ എക്സ്ചേഞ്ചും ഏകാഗ്രതയും

1. ഒരു സെൻട്രിഫ്യൂഗൽ ഫിൽറ്റർ യൂണിറ്റ് എടുത്ത്, ഫിൽറ്റർ ഉപകരണത്തിൽ ബഫറിന്റെ ഉചിതമായ അളവ് (500 µL) ചേർത്ത് അത് ക്യാപ്പ് ചെയ്യുക.
2. ക്യാപ്ഡ് ഫിൽട്ടർ ഉപകരണം സെൻട്രിഫ്യൂജ് റോട്ടറിലേക്ക് വയ്ക്കുക, ക്യാപ് സ്ട്രാപ്പ് റോട്ടറിൻ്റെ മധ്യഭാഗത്തേക്ക് വിന്യസിക്കുക; സമാനമായ ഒരു ഉപകരണവുമായി എതിർ ബാലൻസ്.
3. തന്നിരിക്കുന്ന സമയത്തേക്ക് ഉപകരണം 13,000 xg (അല്ലെങ്കിൽ 14,000 xg) ൽ സ്പിൻ ചെയ്യുക.
4. ഒഴുക്ക് നീക്കം ചെയ്ത് 350 µL വോളിയം ഉപയോഗിച്ച് 1-3 ഘട്ടങ്ങൾ ആവർത്തിക്കുക.
5. സെൻട്രിഫ്യൂജിൽ നിന്ന് അസംബിൾ ചെയ്ത ഉപകരണം നീക്കം ചെയ്യുക, മൈക്രോസെൻട്രിഫ്യൂജ് ട്യൂബിൽ നിന്ന് ഫിൽട്ടർ ഉപകരണം വേർതിരിക്കുക.
6. സംയോജനം വീണ്ടെടുക്കാൻ, വൃത്തിയുള്ള അപകേന്ദ്ര ട്യൂബിൽ ഫിൽട്ടർ ഉപകരണം തലകീഴായി വയ്ക്കുക, റോട്ടറിൻ്റെ മധ്യഭാഗത്തേക്ക് തുറന്ന തൊപ്പി വിന്യസിക്കുക; സമാനമായ ഒരു ഉപകരണവുമായി എതിർ ബാലൻസ്. എസ് കൈമാറാൻ 2 xg യിൽ 1,000 മിനിറ്റ് സ്പിൻ ചെയ്യുകampഉപകരണത്തിൽ നിന്ന് ട്യൂബിലേക്ക് le.

അനുയോജ്യതാ ഷീറ്റ്

ബഫർ അഡിറ്റീവുകൾ
ലഭ്യമായ എല്ലാ കപ്ലിംഗ് കിറ്റുകളുമായും ലിഗാണ്ടുകളുടെ സംയോജനം വിവിധ അഡിറ്റീവുകൾ ഉപയോഗിച്ച് നടത്താം. ഇനിപ്പറയുന്ന ലിസ്റ്റ് പരീക്ഷിച്ചവയെല്ലാം കാണിക്കുന്നു, എന്നാൽ ഇവിടെ ലിസ്റ്റുചെയ്തിട്ടില്ലാത്ത മറ്റുള്ളവയും വിജയകരമായി ഉപയോഗിച്ചേക്കാമെന്നത് ശ്രദ്ധിക്കുക.

* തയോൾ അടിസ്ഥാനമാക്കിയുള്ള കുറയ്ക്കുന്ന ഏജൻ്റുകൾ
** പ്രാഥമിക അമിനുകൾ അടങ്ങിയിരിക്കുന്നു
*** ജാഗ്രത, ലിഗാൻ്റിനെ ദോഷകരമായി ബാധിച്ചേക്കാം

pH/pI

ലിഗാൻഡിൻ്റെ സ്വഭാവസവിശേഷതകളെ ആശ്രയിച്ച് കൺജഗേഷൻ ബഫറിനുള്ള pH മൂല്യം pH 5.0 മുതൽ pH 8.0 വരെയാകാം. <6 ൻ്റെ pI ഉള്ള പ്രോട്ടീനുകളുടെ സംയോജനം നടത്തുമ്പോൾ, കുറഞ്ഞ pH ഉള്ള ഒരു ബഫർ ഉപയോഗിക്കുന്നത് കൺജഗേറ്റിൻ്റെ മികച്ച വിളവിന് കാരണമായേക്കാം എന്നത് ശ്രദ്ധിക്കുക.

ബഫർ	pH	ഓർഡർ നമ്പർ	രചന
ഫോസ്ഫേറ്റ്-സിട്രേറ്റ് ബഫർ	pH 5	–	50 എംഎം ബഫർ ഉപ്പ്, 150 എംഎം NaCl
ബഫർ എം	pH 6.5	BU-M-150-1	50 mM MES, 150 mM NaCl
ബഫർ എ	pH 7.2	BU-P-150-10	50 എംഎം നാ2എച്ച്പിഒ4/NaH2PO4, 150 എംഎം NaCl
ബഫർ സി	pH 8.0	BU-C-150-1	50 എംഎം നാ2എച്ച്പിഒ4/NaH2PO4, 150 എംഎം NaCl

ഉപ്പ് സാന്ദ്രത
സ്റ്റാൻഡേർഡ് കൺജഗേഷനുകൾക്കായി, 50 mM ബഫർ ഉപ്പ്, 150 mM NaCl (മോണോവാലൻ്റ് ഉപ്പ്) എന്നിവ ഉപയോഗിക്കുന്നു.
ശക്തമായി ചാർജ്ജ് ചെയ്ത ലിഗാൻഡുകളുടെ സംയോജനം നടത്തുമ്പോൾ, NaCl ൻ്റെ സാന്ദ്രത ആവശ്യത്തിന് ഉയർന്നതാണെന്ന് ഉറപ്പാക്കുക (400 mM വരെ NaCl ശുപാർശ ചെയ്യുന്നു). അല്ലെങ്കിൽ, ഡിഎൻഎയുടെ മഴ ഉണ്ടാകാം.
മോണോവാലന്റ് സോഡിയം കാറ്റയോണുകളുടെ ഷീൽഡിംഗ് പ്രഭാവം പഞ്ചസാര ഫോസ്ഫേറ്റ് ബാക്ക്ബോണിലെ നെഗറ്റീവ് ചാർജിന്റെ നിർവീര്യീകരണത്തിലൂടെ ഡിഎൻഎ സ്ഥിരതയിലേക്ക് നയിക്കുന്നു.

ഉപയോഗപ്രദമായ ഓർഡർ നമ്പറുകൾ

പട്ടിക 3. ഓർഡർ നമ്പറുകൾ

ഉൽപ്പന്നത്തിൻ്റെ പേര്	തുക	ഓർഡർ നമ്പർ
Y-സ്ട്രക്ചർ അമീൻ കപ്ലിംഗ് കിറ്റ് 2 - പച്ച	3 സംയോജനങ്ങൾ	എച്ച്കെ-എൻ‌വൈ‌എസ്-എൻ‌എച്ച്എസ്-2
അപകേന്ദ്ര ഫിൽട്ടർ യൂണിറ്റ് (10 kDa MWCO)	5 പീസുകൾ.	CF-010-5
10x ബഫർ എ [1]	50 മില്ലി (500 മില്ലി വിളവ്)	BU-P-150-10
5x ബഫർ ബി [5]	50 മില്ലി (250 മില്ലി വിളവ്)	BU-P-1000-5
1x ബഫർ സി [2]	12 മി.ലി	BU-C-150-1

ബന്ധപ്പെടുക

ഡൈനാമിക് ബയോസെൻസറുകൾ GmbH
Perchtinger Str. 8/10 81379 മ്യൂണിക്ക് ജർമ്മനി

ബ്രൂക്കർ സയന്റിഫിക് എൽഎൽസി
40 മാനിംഗ് റോഡ്, മാനിംഗ് പാർക്ക് ബില്ലെറിക്ക, MA 01821 USA

ഓർഡർ വിവരങ്ങൾ order.biosensors@bruker.com
സാങ്കേതിക സഹായം support.dbs@bruker.com

www.dynamic-biosensors.com
ഉപകരണങ്ങളും ചിപ്പുകളും ജർമ്മനിയിലാണ് എഞ്ചിനീയറിംഗ് ചെയ്ത് നിർമ്മിക്കുന്നത്. ©2025 ഡൈനാമിക് ബയോസെൻസറുകൾ GmbH
ഗവേഷണ ഉപയോഗത്തിന് മാത്രം. ക്ലിനിക്കൽ ഡയഗ്നോസ്റ്റിക് നടപടിക്രമങ്ങളിൽ ഉപയോഗിക്കാനുള്ളതല്ല.

1. ബഫർ A: 50 mM Na2HPO4/NaH2PO4, 150 mM NaCl, pH 7.2
2. ബഫർ C: 50 mM Na2HPO4/NaH2PO4, 150 mM NaCl, pH 8.0
3. ബഫർ PE40: 10 mM Na2HPO4/NaH2PO4, 40 mM NaCl, pH 7.4, 0.05 % ട്വീൻ, 50 µM EDTA, 50 µM EGTA
4. 20 kDa-ൽ കൂടുതലുള്ള തന്മാത്രാ ഭാരം ഉള്ള പ്രോട്ടീനുകളുടെ സംയോജനത്തിന്: വേഗത്തിലുള്ള ഏകാഗ്രത പ്രക്രിയയ്ക്കായി 10 kDa യുടെ MWCO ഉള്ള അപകേന്ദ്ര ഫിൽട്ടർ യൂണിറ്റുകൾ ഓർഡർ ചെയ്യാവുന്നതാണ് (ഓർഡർ നമ്പർ: CF-010-5).
5. ബഫർ B: 50 mM Na2HPO4/NaH2PO4, 1 M NaCl, pH 7.2

www.dynamic-biosensors.com

പ്രമാണങ്ങൾ / വിഭവങ്ങൾ

ഡൈനാമിക് ബയോസെൻസറുകൾ വൈ-സ്ട്രക്ചർ അമിൻ കപ്ലിംഗ് കിറ്റ് 1 [pdf] ഉപയോക്തൃ മാനുവൽ HK-NYS-NHS-1, Y-സ്ട്രക്ചർ അമീൻ കപ്ലിംഗ് കിറ്റ് 1, അമീൻ കപ്ലിംഗ് കിറ്റ് 1, കപ്ലിംഗ് കിറ്റ് 1, കിറ്റ് 1

റഫറൻസുകൾ

• ഉപയോക്തൃ മാനുവൽ