കാര്യക്ഷമമായ ലാബ് ഓട്ടോമേഷൻ നിർദ്ദേശങ്ങൾക്കായുള്ള opentrons OT-2 വർക്ക്സ്റ്റേഷനുകൾ

തയ്യാറെടുപ്പ് ഷീറ്റ്
അളവുകളും സ്റ്റാറ്റിസ്റ്റിക്കൽ വിശകലനവും

കെന്നഡി ബേ എഴുതിയത്, പിഎച്ച്.ഡി. കിന്നരി വാട്സൺ, പിഎച്ച്.ഡി.

ആമുഖം

പാഠ്യപദ്ധതി പഠിപ്പിക്കുന്നതിന് മുമ്പ്, ക്ലാസിന് മുമ്പ് ഇനിപ്പറയുന്ന ഘട്ടങ്ങൾ പൂർത്തിയാക്കുക.

OT-2 അൺബോക്സ് ചെയ്യുക
Opentrons ആപ്പ് സജ്ജീകരിക്കുക
പൈപ്പറ്റുകൾ ഘടിപ്പിക്കുക
ഡെക്ക് കാലിബ്രേറ്റ് ചെയ്യുക
ടിപ്പ് നീളവും പൈപ്പറ്റ് ഓഫ്‌സെറ്റും കാലിബ്രേറ്റ് ചെയ്യുക
ഏതെങ്കിലും അനുബന്ധ പ്രോട്ടോക്കോളുകൾ ആപ്പിലേക്ക് ഇമ്പോർട്ടുചെയ്യുക
OT-2-ൽ പ്രോട്ടോക്കോൾ പരീക്ഷിക്കുക

അധിക പിന്തുണ ആവശ്യമുണ്ടോ?

സാങ്കേതിക പിന്തുണയ്‌ക്കായി, ദയവായി ഞങ്ങളുടെ പരിശോധിക്കുക Opentrons സഹായ കേന്ദ്രം പ്രസക്തമായ ലേഖനങ്ങൾക്ക്. നിങ്ങൾക്ക് കൂടുതൽ പിന്തുണ ആവശ്യമുണ്ടെങ്കിൽ, ദയവായി ബന്ധപ്പെടുക support@opentrons.com.

പാഠപദ്ധതിയുമായി ബന്ധപ്പെട്ട് നിങ്ങൾക്ക് ചോദ്യങ്ങളുണ്ടെങ്കിൽ, രചയിതാക്കളായ കെന്നഡി ബേയെ ബന്ധപ്പെടുക kennedy@opentrons.com, അല്ലെങ്കിൽ കിന്നരി വാട്സൺ, at kinnari@opentrons.com.

അധ്യാപക ഗൈഡ്
അളവുകളും സ്റ്റാറ്റിസ്റ്റിക്കൽ വിശകലനവും

കെന്നഡി ബേ എഴുതിയത്, പിഎച്ച്.ഡി. കിന്നരി വാട്സൺ, പിഎച്ച്.ഡി.

ഉദ്ദേശം

ഒരു സ്റ്റാൻഡേർഡ് കർവ് സൃഷ്ടിക്കുന്നതിന് സീരിയൽ ഡൈല്യൂഷനുകൾ ഉപയോഗിക്കുന്നതിനും ഇൻ്റർപോളേറ്റിംഗിനായി സ്റ്റാൻഡേർഡ് കർവുകളുടെ ഉപയോഗം സംബന്ധിച്ചും വിദ്യാർത്ഥികളുടെ അവബോധം വളർത്തിയെടുക്കാൻ ഈ ലാബ് ലക്ഷ്യമിടുന്നു.ampലെ മൂല്യങ്ങൾ. ഇതിൽ ഒരു അഭിനന്ദനം ഉൾപ്പെടുന്നു:

• അടിസ്ഥാന പൈപ്പിംഗ് കഴിവുകൾ
• സീരിയൽ ഡൈല്യൂഷനുകൾ
• പകർപ്പുകൾ അളക്കുന്നു
• സ്റ്റാൻഡേർഡ് കർവിൻ്റെ പരിധി
• പ്രാധാന്യം വിലയിരുത്താൻ സ്ഥിതിവിവരക്കണക്കുകളുടെ ഉപയോഗം

വിദ്യാർത്ഥികൾ ഓട്ടോമേറ്റഡ് ലിക്വിഡ് ഹാൻഡ്‌ലിംഗിന് സമാന്തരമായി മാനുവൽ പൈപ്പറ്റിംഗ് നടത്തുന്നു, ഇത് രണ്ട് സാങ്കേതികതകളുടെയും ശക്തിയും അവസരങ്ങളും കാണാൻ വിദ്യാർത്ഥികളെ അനുവദിക്കുന്നു.

വിദ്യാർത്ഥി പ്രേക്ഷകർ

മിഡ്-ലെവൽ ബിരുദ ബയോളജി കോഴ്‌സുകളിലേക്കുള്ള പ്രവേശനത്തിനായി ഈ ലാബ് രൂപകൽപ്പന ചെയ്‌തിരിക്കുന്നു. ക്ലാസിൽ എൻറോൾ ചെയ്ത എത്ര വിദ്യാർത്ഥികളെയും ഉൾക്കൊള്ളാൻ ഇത് വഴക്കമുള്ളതാണ്.

പശ്ചാത്തല അറിവ്

വിദ്യാർത്ഥികൾക്ക് പൈപ്പറ്റിംഗ്, സ്പെക്ട്രോഫോട്ടോമെട്രി, സ്റ്റാൻഡേർഡ് കർവുകൾ, സ്റ്റാറ്റിസ്റ്റിക്കൽ അനാലിസിസ് എന്നിവയെക്കുറിച്ച് ആശയപരമായ ധാരണ ഉണ്ടായിരിക്കണം.

പ്രധാന കഴിവുകൾ

ലബോറട്ടറി കഴിവുകൾ
പൈപ്പിടൽ, എസ്ampലെ തയ്യാറാക്കൽ, ലബോറട്ടറി ഓട്ടോമേഷൻ ഉപകരണങ്ങളുടെ ഉപയോഗം

ഡാറ്റ വിശകലനം
സ്റ്റാൻഡേർഡ് കർവുകൾ, ഇൻ്റർപോളേഷൻ, സ്റ്റാറ്റിസ്റ്റിക്കൽ വിശകലനം എന്നിവ വികസിപ്പിക്കുന്നു

വിമർശനാത്മക ചിന്ത
പരീക്ഷണാത്മക ഡാറ്റയുടെ വ്യാഖ്യാനം, ട്രബിൾഷൂട്ടിംഗ്, ന്യായമായ നിഗമനങ്ങളിൽ എത്തിച്ചേരൽ

സപ്ലൈസ്

ഓപ്പൺട്രോൺ പ്രോട്ടോക്കോൾ

എന്നതിൽ നിന്ന് പ്രോട്ടോക്കോൾ ഡൗൺലോഡ് ചെയ്യുക
https://protocols.opentrons.com/protocol/customizable_s erial_dilution_ot2

• ഇനിപ്പറയുന്ന പാരാമീറ്ററുകൾ തിരഞ്ഞെടുക്കുക webനിങ്ങളുടെ സജ്ജീകരണവും വിതരണവും അനുസരിച്ച് പേജ്:
  • പൈപ്പറ്റ് തരം
  • മൗണ്ട് സൈഡ്
  • നുറുങ്ങ് തരം
  • ട്രഫ് തരം
  • പ്ലേറ്റ് തരം
• ഇതിനായി സ്ഥിരസ്ഥിതി ക്രമീകരണങ്ങൾ സൂക്ഷിക്കുക:
  • നേർപ്പിക്കൽ ഘടകം (3)
  • നേർപ്പിക്കലുകളുടെ എണ്ണം (10)
  • മൊത്തം മിക്സിംഗ് വോളിയം (150)
  • കിണർ പ്ലേറ്റിൽ ശൂന്യം (അതെ)
  • നുറുങ്ങ് ഉപയോഗ തന്ത്രം (ഒരു നുറുങ്ങ് ഉപയോഗിക്കുക)
  • വായു വിടവിൻ്റെ അളവ് (10)

ഓപ്പൺട്രോൺ ഉപകരണങ്ങൾ

ഓപ്പൺട്രോൺസ് OT-2 ഓട്ടോമേറ്റഡ് ലിക്വിഡ് ഹാൻഡ്ലിംഗ് റോബോട്ട്
ഓപ്പൺട്രോൺസ് p300 8-ചാനൽ പൈപ്പറ്റ്

നോൺ-ഓപ്പൺട്രോൺ ഉപകരണങ്ങൾ

പ്ലേറ്റ് അടിസ്ഥാനമാക്കിയുള്ള സ്പെക്ട്രോഫോട്ടോമീറ്റർ
ഡാറ്റ വിശകലനത്തിനുള്ള സോഫ്‌റ്റ്‌വെയർ (ഉദാ. Excel അല്ലെങ്കിൽ സമർപ്പിത സ്റ്റാറ്റിസ്റ്റിക്‌സ് സോഫ്റ്റ്‌വെയർ)
P1000 വേരിയബിൾ വോളിയം മാനുവൽ പൈപ്പറ്റുകൾ (ഒരു വിദ്യാർത്ഥിക്ക് ഒന്ന്)
P100 വേരിയബിൾ വോളിയം മാനുവൽ പൈപ്പറ്റ് (പാർട്ട് എ പ്രദർശിപ്പിക്കുന്നതിന് ഒരെണ്ണം മാത്രം ആവശ്യമാണ്)

ലാബ്‌വെയർ

ഓപ്പൺട്രോൺസ് 300 μL ടിപ്പ് റാക്ക്
12-കിണർ തൊട്ടി
96-കിണർ ഫ്ലാറ്റ് ബോട്ടം പ്ലേറ്റ്
ടെസ്റ്റ് ട്യൂബുകൾ (ഒരു വിദ്യാർത്ഥിക്ക് 6)
ഡ്രോപ്പർ (ഒരു വിദ്യാർത്ഥിക്ക് 1)

റിയാഗൻ്റുകൾ

ഒരു വിദ്യാർത്ഥിക്ക് 1000 mL diH20
FD&C ബ്ലൂ നമ്പർ 1 (ഈ ലാബിൻ്റെ വികസനത്തിൽ McCormick® ഉപയോഗിച്ചു)

പരീക്ഷണ കാലയളവ്

ആവശ്യമായ ക്ലാസ് സെഷനുകൾ
1

ലാബ് പ്രവർത്തന സമയം
കണക്കാക്കിയ ആകെ സമയം: 2.5-3 മണിക്കൂർ
ആമുഖവും കാലിബ്രേഷനും കർവ് ജനറേഷൻ: 35 മിനിറ്റ്
Sample തയ്യാറാക്കലും പൈപ്പിംഗും: 1 മണിക്കൂർ
ഡാറ്റ ശേഖരണം: 30 മിനിറ്റ്

അടിസ്ഥാന ട്രബിൾഷൂട്ടിംഗ്

1. ക്ലാസിന് മുമ്പ് ഒരു ട്രയൽ റൺ നടത്തുക; ഈ രീതിയിൽ വിദ്യാർത്ഥികൾ എത്തുന്നതിന് മുമ്പ് അപ്രതീക്ഷിത സംഭവങ്ങൾ പരിഹരിക്കാൻ കഴിയും.
2. ടിപ്‌സ് സ്‌ട്രൈക്കിംഗ് പ്ലേറ്റുകളിലെ പ്രശ്‌നങ്ങൾ മിക്കവാറും എല്ലായ്‌പ്പോഴും ഇതര ലാബ്‌വെയറോ റോബോട്ട് കാലിബ്രേഷനോ ഉപയോഗിക്കുന്നത് മൂലമാണ്. നിങ്ങൾ ഇത് അനുഭവിക്കുകയും ശരിയായ ലാബ്‌വെയർ സ്ഥിരീകരിക്കുകയും ചെയ്താൽ, റോബോട്ട് വീണ്ടും കാലിബ്രേറ്റ് ചെയ്യാൻ ശ്രമിക്കുക.
3. നിങ്ങൾക്ക് ഓപ്പൺട്രോൺ പിന്തുണയുമായി ബന്ധപ്പെടണമെങ്കിൽ, നിങ്ങൾ ഞങ്ങളുടെ ഓപ്പൺട്രോൺസ് ഫോർ എഡ്യൂക്കേഷൻ പ്രോഗ്രാമിൻ്റെ ഭാഗമാണെന്നും നിങ്ങളുടെ അടുത്ത ലാബ് ക്ലാസിൻ്റെ തീയതിയും അവരെ അറിയിക്കുക.

ആവശ്യമായ പ്രീ-ലാബ് പ്രവർത്തനങ്ങൾ

ഈ ലാബ് ആരംഭിക്കുന്നതിന് മുമ്പ്, വിദ്യാർത്ഥികൾക്ക് ഇനിപ്പറയുന്ന സാങ്കേതിക കഴിവുകളും സൈദ്ധാന്തിക പരിജ്ഞാനവും ഉണ്ടായിരിക്കണം:

• ഒരു മാനുവൽ പൈപ്പറ്റിലേക്ക് ഒരു പൈപ്പറ്റ് ടിപ്പ് ലോഡ് ചെയ്യുക
• മാനുവൽ പൈപ്പറ്റുകളുടെ വോളിയം ക്രമീകരണം
• സ്പെക്ട്രോഫോട്ടോമെട്രിയുടെ സൈദ്ധാന്തിക പരിജ്ഞാനം - ഈ ലാബിൽ സ്പെക്ട്രോഫോട്ടോമീറ്റർ പ്രവർത്തിപ്പിക്കുന്നത് അധ്യാപകനാണ്.
• വക്രത്തെ നിർവചിക്കുന്ന സമവാക്യത്തെക്കുറിച്ചുള്ള അറിവും മൂല്യങ്ങളെ ഇൻ്റർപോളേറ്റ് ചെയ്യാനുള്ള കഴിവും ഉൾപ്പെടെയുള്ള സ്റ്റാൻഡേർഡ് കർവുകളെക്കുറിച്ചുള്ള ധാരണ
• അടിസ്ഥാന സ്ഥിതിവിവര വിശകലനത്തിൻ്റെ ശക്തമായ ഗ്രാപ്‌സ്, കണക്കുകൂട്ടലും വ്യാഖ്യാനവും ഉൾപ്പെടെയുള്ള മാർഗങ്ങൾ, സ്റ്റാൻഡേർഡ് വ്യതിയാനങ്ങൾ, R²

നടപടിക്രമ ഗൈഡ്

1. ലാബ് ആമുഖം ~ 15 മിനിറ്റ്

വിദ്യാർത്ഥികൾ ക്ലാസിൽ വരുന്നതിന് മുമ്പ് ലാബ് ഗൈഡ് വായിക്കണം, എന്നിരുന്നാലും, പൈപ്പറ്റിംഗ് സാങ്കേതികതകളെക്കുറിച്ച് ചർച്ച ചെയ്യാൻ 10 മിനിറ്റ് ചെലവഴിക്കാൻ പദ്ധതിയിടുക.view സ്റ്റാൻഡേർഡ് കർവുകൾ, ഇൻ്റർപോളിംഗ് എസ്ample മൂല്യങ്ങൾ.

2. കാലിബ്രേഷൻ കർവ് ജനറേഷൻ ~ 20 മിനിറ്റ്

അടുത്തതായി, ക്ലാസിനായുള്ള സ്റ്റാൻഡേർഡ് കർവ് ജനറേഷൻ (പാർട്ട് എ) പ്രദർശിപ്പിക്കുക (OT-2 റോബോട്ടിൻ്റെയും സ്പെക്ട്രോഫോട്ടോമീറ്ററിൻ്റെയും ഏക ഓപ്പറേറ്റർ അധ്യാപകനായിരിക്കുമെന്ന് ഈ ലാബ് അനുമാനിക്കുന്നു):

1. 50 μL ബ്ലൂ ഫുഡ് ഡൈയും 10 mL diH2O യും ഉപയോഗിച്ച് ബ്ലൂ ഡൈ ലായനി തയ്യാറാക്കുക.
2. 200 കിണർ പരന്ന അടിത്തട്ട് പ്ലേറ്റിലെ A1-H1 കിണറുകളിൽ 96 μL നീല ഡൈ ലായനി ചേർക്കുക.
3. ട്രഫ് റിസർവോയറിൻ്റെ A20 കിണറ്റിൽ 1 മില്ലി വെള്ളം ചേർക്കുക.
   (ശ്രദ്ധിക്കുക: അവസാനത്തെ നേർപ്പിനു ശേഷമുള്ള കോളം ശൂന്യമായ സ്ഥലങ്ങളുടെ സ്ഥിരസ്ഥിതി സ്ഥാനമാണ്. തൊട്ടിയുടെ/സംഭരണിയുടെ അവസാന കിണർ ഡിഫോൾട്ട് ലിക്വിഡ് ട്രാഷാണ്.)
4. ലാബ്‌വെയർ ഇനിപ്പറയുന്ന രീതിയിൽ ക്രമീകരിക്കുക:
   എ. സ്ലോട്ട് 1 = ഓപ്പൺട്രോൺസ് 300 μL ടിപ്പ് റാക്ക്
   ബി. സ്ലോട്ട് 2 = 12-ചാനൽ റിസർവോയർ
   സി. സ്ലോട്ട് 3 = 96-കിണർ ഫ്ലാറ്റ് താഴെ പ്ലേറ്റ്
5. പ്രോട്ടോക്കോൾ പ്രവർത്തിപ്പിക്കുന്നതിന് OT-2 റൺ ആപ്പിലേക്ക് പോകുക.
6. 96-കിണർ പ്ലേറ്റിൻ്റെ ആഗിരണം 450 nm-ൽ അളക്കുക.

3. ചർച്ച ~ 5 മിനിറ്റ്

സീരിയൽ ഡൈല്യൂഷനുകൾ പ്രവർത്തിപ്പിച്ച് സ്റ്റാൻഡേർഡ് കർവ് സൃഷ്‌ടിച്ചതിന് ശേഷം, ഒരു ക്ലാസായി വീണ്ടും ഒന്നിച്ച് വന്ന് ഓട്ടോമേഷൻ്റെ ശക്തിയും അവസരങ്ങളും ചർച്ച ചെയ്യാൻ നിങ്ങൾ ആഗ്രഹിച്ചേക്കാം.

4. ഭാഗം ബി: മാനുവൽ എസ്ample തയ്യാറാക്കൽ ~ 1 മണിക്കൂർ

ലാബിൻ്റെ ഈ ഭാഗത്ത്, ലാബിൻ്റെ ഭാഗം ബി സ്വതന്ത്രമായി പൂർത്തിയാക്കാൻ വിദ്യാർത്ഥികളോട് ആവശ്യപ്പെടും:

1. സാന്ദ്രീകൃത ചായത്തിൻ്റെ 200 μL അലിക്വോട്ട് ശേഖരിക്കാൻ ഒരു ടെസ്റ്റ് ട്യൂബ് ഉപയോഗിക്കുക.
2. രണ്ടാമത്തെ ടെസ്റ്റ് ട്യൂബ് ഉപയോഗിച്ച് 4 മില്ലി ഡിലൂയൻ്റ് (diH2O) ശേഖരിക്കുക.
3. ശേഷിക്കുന്ന 800 ട്യൂബുകളിൽ ഓരോന്നിലും കുറഞ്ഞത് 20 μL diH4 പൈപ്പ് ഇടുക. ഇവ നിങ്ങളുടേതായി മാറുംampലെസ്.
4. ഡ്രോപ്പർ ഉപയോഗിച്ച് സാന്ദ്രീകൃത ചായം ഓരോ സെക്കൻ്റിലേക്കും വ്യത്യസ്ത അളവിൽ വിതരണം ചെയ്യുകampലെ ട്യൂബ്.
5. നിങ്ങളുടെ ആദ്യ സെക്കൻ്റിൻ്റെ 200 μL പൈപ്പ്amp96 കിണർ പ്ലേറ്റിലെ ഒരു കിണറ്റിലേക്ക് le. ഇത് 3 തവണ കൂടി ആവർത്തിക്കുക, അതിലൂടെ നിങ്ങൾക്ക് അതിൻ്റെ 4 പകർപ്പുകൾ ലഭിക്കുംampപ്ലേറ്റിൻ്റെ 4 കിണറുകളിൽ le. ഏതൊക്കെ കിണറുകളാണ് നിങ്ങൾ സ്ഥാപിച്ചതെന്ന് എഴുതുകample into (നിങ്ങൾ നിങ്ങളുടെ 96 കിണർ പ്ലേറ്റ് മറ്റ് വിദ്യാർത്ഥികളുമായി പങ്കിടുന്നുണ്ടാകാം - ഏതാണ് എന്ന് നിങ്ങൾക്ക് അറിയണംampലെസ് നിങ്ങളുടേതാണ്!).
6. നിങ്ങളുടെ ശേഷിക്കുന്ന 3 സെക്കൻഡിനായി മുകളിലുള്ള ഘട്ടം ആവർത്തിക്കുകampലെസ്. നിങ്ങൾ ഓരോന്നിൻ്റെയും 4 കിണറുകൾ വേണംample, ആകെ 16 കിണറുകൾക്കായി, 96 കിണർ പ്ലേറ്റിൽ നിറഞ്ഞു.
7. 96-കിണർ പ്ലേറ്റിൻ്റെ ആഗിരണം 450 nm-ൽ അളക്കുക.

വിദ്യാർത്ഥികൾ പാർട്ട് ബി പൂർത്തിയാക്കുമ്പോൾ, ചോദ്യങ്ങൾക്ക് ഉത്തരം നൽകാനും വിദ്യാർത്ഥികളുടെ പൈപ്പിംഗ് ടെക്നിക് നിരീക്ഷിക്കാനും ലാബിൽ ചുറ്റിക്കറങ്ങാനും അവർ ഉപയോഗിക്കുന്ന കിണറുകൾ രേഖപ്പെടുത്താനും വിദ്യാർത്ഥികളെ ഓർമ്മിപ്പിക്കാനും ആവശ്യാനുസരണം വ്യക്തിഗത സഹായം നൽകാനും ആസൂത്രണം ചെയ്യുക.

5. ഡാറ്റ ശേഖരണം ~ 30 മിനിറ്റ്

ഡാറ്റ ശേഖരണത്തിന് 30 മിനിറ്റ് അനുവദിക്കുക.

6. ബ്രേക്ക്ഡൗൺ ~ 10 മിനിറ്റ്

ലാബ് റിപ്പോർട്ട് ഹ്രസ്വമായി അവതരിപ്പിക്കുന്നതിനും വിദ്യാർത്ഥികൾക്ക് അവരുടെ സ്റ്റേഷനുകൾ വൃത്തിയാക്കുന്നതിനും ശേഷിക്കുന്ന ചോദ്യങ്ങൾ ചോദിക്കുന്നതിനും മതിയായ സമയം നൽകുന്നതിനും ലാബിൻ്റെ അവസാനത്തിൽ സമയം നൽകുക.

ലാബ് റിപ്പോർട്ട്

നിർദ്ദേശങ്ങൾ

കാലിബ്രേഷൻ കർവ് ഡാറ്റ, ഇൻ്റർപോളേറ്റഡ് എസ് എന്നിവ ഉൾപ്പെടുന്ന ഒരു സമഗ്ര ലാബ് റിപ്പോർട്ട് തയ്യാറാക്കാൻ വിദ്യാർത്ഥികളെ ചുമതലപ്പെടുത്തുകampലെ മൂല്യങ്ങൾ, സ്റ്റാറ്റിസ്റ്റിക്കൽ വിശകലനം. റിപ്പോർട്ട് ഘടനയ്ക്കും ഡാറ്റാ അവതരണത്തിനും മാർഗ്ഗനിർദ്ദേശങ്ങൾ നൽകുക. പര്യവേക്ഷണത്തിനുള്ള ചില ആശയങ്ങൾ ചുവടെയുണ്ട്.

• സ്റ്റാൻഡേർഡ് കർവ് സ്ഥാപിക്കുക
  • നിങ്ങളുടെ മാനദണ്ഡങ്ങൾക്കായി വ്യക്തിഗത മൂല്യങ്ങൾ കൂട്ടിച്ചേർക്കുക.
  • ഓരോന്നിലും ശരാശരിയും സ്റ്റാൻഡേർഡ് ഡീവിയേഷനും കണ്ടെത്തുക.
  • സ്റ്റാൻഡേർഡ് കർവ് നിർവചിക്കുന്നതിന് ശരാശരി മൂല്യങ്ങൾ ഉപയോഗിക്കുക.
  • R2 മൂല്യം കണക്കാക്കിക്കൊണ്ട് കണക്കുകൂട്ടിയ വക്രം ഡാറ്റ പോയിൻ്റുകൾക്ക് എത്രത്തോളം യോജിക്കുന്നുവെന്ന് നിർണ്ണയിക്കുക. ഡാറ്റാ പോയിൻ്റുകൾക്ക് യോജിച്ച ഒരു ലൈനിന് R2 മൂല്യം 1 ഉണ്ടെന്ന് ഓർക്കുക. ഓരോ പരീക്ഷണത്തിനും R2 മൂല്യം കണക്കാക്കി ഒരു പുതിയ സ്റ്റാൻഡേർഡ് കർവ് സൃഷ്ടിക്കേണ്ടത് പ്രധാനമാണ്.
• എസ്സിൻ്റെ ഇൻ്റർപോളേഷൻampലെ മൂല്യങ്ങൾ
  • s ഇൻ്റർപോളേറ്റ് ചെയ്യാൻ നിങ്ങളുടെ കണക്കാക്കിയ സ്റ്റാൻഡേർഡ് കർവ് ഉപയോഗിക്കുകample മൂല്യങ്ങൾ സ്വമേധയാ.
  • നിങ്ങളുടെ ഓരോന്നിൻ്റെയും പകർപ്പുകൾ തമ്മിലുള്ള സ്റ്റാൻഡേർഡ് ഡീവിയേഷൻ എന്താണ്ampലെസ്?
  • ഈ വ്യത്യാസത്തിന് സാധ്യമായ ചില കാരണങ്ങൾ എന്തൊക്കെയാണ്?
  • പകർപ്പുകൾ അളക്കുന്നതിൻ്റെ പ്രയോജനങ്ങൾ എന്തൊക്കെയാണ്?
• വ്യത്യസ്‌ത സെറ്റുകൾക്കിടയിൽ നിങ്ങൾക്ക് എന്ത് ട്രെൻഡുകൾ നിരീക്ഷിക്കാനാകുംampലെസ്? നിരീക്ഷിക്കപ്പെട്ട ഏതെങ്കിലും വ്യത്യാസങ്ങൾ സ്ഥിതിവിവരക്കണക്ക് പ്രാധാന്യമുള്ളതാണോ?
  • എന്തെങ്കിലും പുറത്തുള്ളവർ ഉണ്ടോ? സ്ഥിതിവിവരക്കണക്കുകളുടെ ഉപയോഗം എങ്ങനെയാണ് ഔട്ട്‌ലൈയറുകൾ vs ചെറി-പിക്കിംഗ് ഡാറ്റയുടെ വിലയിരുത്തലിന് അനുവദിക്കുന്നത്?

വിദ്യാർത്ഥി ഗൈഡ്
അളവുകളും സ്റ്റാറ്റിസ്റ്റിക്കൽ വിശകലനവും

ഉദ്ദേശം

ഒരു സ്റ്റാൻഡേർഡ് കർവ് സൃഷ്ടിക്കാൻ സീരിയൽ ഡൈല്യൂഷനുകൾ ഉപയോഗിക്കുന്നതിനെക്കുറിച്ചും ഇൻ്റർപോളേറ്റ് ചെയ്യുന്നതിന് സ്റ്റാൻഡേർഡ് കർവുകളുടെ ഉപയോഗത്തെക്കുറിച്ചും ഈ ലാബ് നിങ്ങളുടെ ധാരണ വികസിപ്പിക്കും.ampലെ മൂല്യങ്ങൾ. ഇതിൽ ഒരു അഭിനന്ദനം ഉൾപ്പെടുന്നു:

• അടിസ്ഥാന പൈപ്പിംഗ് കഴിവുകൾ
• സീരിയൽ ഡൈല്യൂഷനുകൾ
• പകർപ്പുകൾ അളക്കുന്നു
• സ്റ്റാൻഡേർഡ് കർവിൻ്റെ പരിധി
• പ്രാധാന്യം വിലയിരുത്താൻ സ്ഥിതിവിവരക്കണക്കുകളുടെ ഉപയോഗം

ഈ ലാബിൽ വിദ്യാർത്ഥികൾ മാനുവൽ പൈപ്പറ്റിംഗിലൂടെയും OT-2 ഓട്ടോമേറ്റഡ് ലിക്വിഡ് ഹാൻഡ്‌ലറിലൂടെയും ലഭിച്ച ഡാറ്റ ഉപയോഗിക്കും, ഇത് രണ്ട് സാങ്കേതികതകളുടെയും ശക്തിയും അവസരങ്ങളും കാണാൻ വിദ്യാർത്ഥികളെ അനുവദിക്കുന്നു.

ആവശ്യമായ ഉപകരണങ്ങൾ

• ഓപ്പൺട്രോൺസ് OT-2 ഓട്ടോമേറ്റഡ് ലിക്വിഡ് ഹാൻഡ്ലിംഗ് റോബോട്ട്
• ഓപ്പൺട്രോൺസ് p300 8-ചാനൽ പൈപ്പറ്റ്
• ഓപ്പൺട്രോൺസ് 300 μL ടിപ്പ് റാക്ക്
• മാനുവൽ പൈപ്പറ്റ് (P1000)
• 12-കിണർ തൊട്ടി
• 96-കിണർ ഫ്ലാറ്റ് ബോട്ടം പ്ലേറ്റ്
• 1000 മില്ലി ഡീയോണൈസ്ഡ് വെള്ളം (diH2O)
• FD&C ബ്ലൂ നമ്പർ 1 (ഈ ലാബിൻ്റെ വികസനത്തിൽ McCormick® ഉപയോഗിച്ചു)
• 6 ടെസ്റ്റ് ട്യൂബുകൾ
• ഡ്രോപ്പർ

പരീക്ഷണാത്മക നടപടിക്രമം

ഭാഗം എ: നിരീക്ഷിക്കുക സ്റ്റാൻഡേർഡ് കർവ് ജനറേഷൻ

OT-2 സീരിയൽ ഡൈല്യൂഷനുകളുടെ ഓട്ടോമേറ്റഡ് പൈപ്പറ്റിംഗ് നടത്തും. സ്പെക്ട്രോഫോട്ടോമീറ്റർ ഉപയോഗിച്ച് നിങ്ങളുടെ അധ്യാപകൻ ഈ മാനദണ്ഡങ്ങൾ അളക്കുമ്പോൾ അവർക്ക് ഒരു സാധാരണ വക്രം സൃഷ്ടിക്കാൻ കഴിയും.

OT-2 റോബോട്ട് തയ്യാറാക്കാനും പ്രവർത്തിപ്പിക്കാനും നിങ്ങളുടെ അധ്യാപകൻ ഈ നിർദ്ദേശങ്ങൾ പാലിക്കും. ഓട്ടോമേറ്റഡ് OT-1 റോബോട്ട് സ്റ്റെപ്പുകൾ പ്രവർത്തിപ്പിക്കുന്നതിന് മുമ്പ് 4-2 ഘട്ടങ്ങൾ സ്വമേധയാ പൂർത്തിയാക്കും (നിങ്ങളുടെ അധ്യാപകനോ വിദ്യാർത്ഥി സന്നദ്ധപ്രവർത്തകരോ):

1. 50 μL ബ്ലൂ ഫുഡ് ഡൈയും 10 മില്ലി ഡിഎച്ച്2ഒയും ഉപയോഗിച്ച് ബ്ലൂ ഡൈ ലായനി തയ്യാറാക്കുക.
2. 200 കിണർ ഫ്ലാറ്റ് അടിത്തട്ട് പ്ലേറ്റിൻ്റെ A1-H1 കിണറുകളിലേക്ക് 96 μL നീല ഡൈ ലായനി ചേർക്കുക.
3. ട്രഫ് റിസർവോയറിൻ്റെ A20 കിണറ്റിൽ 1 മില്ലി വെള്ളം ചേർക്കുക.

(ശ്രദ്ധിക്കുക: അവസാനത്തെ നേർപ്പിനു ശേഷമുള്ള കോളം ശൂന്യമായ സ്ഥലങ്ങളുടെ സ്ഥിരസ്ഥിതി സ്ഥാനമാണ്. തൊട്ടിയുടെ/സംഭരണിയുടെ അവസാന കിണർ ഡിഫോൾട്ട് ലിക്വിഡ് ട്രാഷാണ്.)

4. ലാബ്‌വെയർ ഇനിപ്പറയുന്ന രീതിയിൽ ക്രമീകരിക്കുക:

ο സ്ലോട്ട് 1 = ഓപ്പൺട്രോൺസ് 300 μL ടിപ്പ് റാക്ക്
ο സ്ലോട്ട് 2 = 12-ചാനൽ റിസർവോയർ
ο സ്ലോട്ട് 3 = 96-കിണർ പരന്ന അടിഭാഗം പ്ലേറ്റ്

5. ഓട്ടോമേറ്റഡ് പ്രോട്ടോക്കോൾ പ്രവർത്തിപ്പിക്കുന്നതിന് OT-2 റൺ ആപ്പിലേക്ക് പോകുക.

എന്നതിൽ നിന്ന് പ്രോട്ടോക്കോൾ ഡൗൺലോഡ് ചെയ്യുക
https://protocols.opentrons.com/protocol/customiza ble_serial_dilution_ot2

• ഇനിപ്പറയുന്ന പാരാമീറ്ററുകൾ തിരഞ്ഞെടുക്കുക webനിങ്ങളുടെ സജ്ജീകരണവും വിതരണവും അനുസരിച്ച് പേജ്:
  • പൈപ്പറ്റ് തരം
  • മൗണ്ട് സൈഡ്
  • നുറുങ്ങ് തരം
  • ട്രഫ് തരം
  • പ്ലേറ്റ് തരം
• ഇതിനായി സ്ഥിരസ്ഥിതി ക്രമീകരണങ്ങൾ സൂക്ഷിക്കുക:
  • നേർപ്പിക്കൽ ഘടകം (3)
  • നേർപ്പിക്കലുകളുടെ എണ്ണം (10)
  • മൊത്തം മിക്സിംഗ് വോളിയം (150)
  • കിണർ പ്ലേറ്റിൽ ശൂന്യം (അതെ)
  • നുറുങ്ങ് ഉപയോഗ തന്ത്രം (ഒരു നുറുങ്ങ് ഉപയോഗിക്കുക)
  • വായു വിടവിൻ്റെ അളവ് (10)

6. 96-കിണർ പ്ലേറ്റിൻ്റെ ആഗിരണം 450 nm-ൽ അളക്കുക.

ശ്രദ്ധിക്കുക: ഒരു സ്റ്റാൻഡേർഡിൻ്റെ അലിക്കോട്ടുകൾ ക്രമാനുഗതമായി ഡൈല്യൂൻ്റുകളുടെ അളവ് വർദ്ധിപ്പിക്കുന്നതിലൂടെയാണ് സീരിയൽ ഡൈല്യൂഷനുകൾ നടത്തുന്നത് (ഡയഗ്രം കാണുക). OT-2 സാന്ദ്രീകൃത മാനദണ്ഡങ്ങളുടെ ഒരു അലിഖോട്ട് ആഗ്രഹിക്കുകയും അത് നേർപ്പിക്കുന്നതിലേക്ക് വിതരണം ചെയ്യുകയും ചെയ്യും. പിന്നീട് അത് ദ്രാവകം മുകളിലേക്കും താഴേക്കും ആവർത്തിച്ച് പൈപ്പ് ചെയ്യുന്നതിലൂടെ സാന്ദ്രീകൃത ചായവും നേർപ്പും കലർത്തും. അപ്പോൾ റോബോട്ട് ആദ്യത്തെ മിക്സഡ് സ്റ്റാൻഡേർഡിൻ്റെ ഒരു അലിഖോട്ട് ആസ്പിറേറ്റ് ചെയ്യുകയും അത് നേർപ്പിക്കുന്നതിൻ്റെ അടുത്ത നിരയിലേക്ക് വിതരണം ചെയ്യുകയും ചെയ്യും.

ഭാഗം ബി: നടത്തുക മാനുവൽ എസ്ample തയ്യാറാക്കൽ

1. സാന്ദ്രീകൃത ചായത്തിൻ്റെ 200 μL അലിക്വോട്ട് ശേഖരിക്കാൻ ഒരു ടെസ്റ്റ് ട്യൂബ് ഉപയോഗിക്കുക.
2. രണ്ടാമത്തെ ടെസ്റ്റ് ട്യൂബ് ഉപയോഗിച്ച് 4 മില്ലി ഡിലൂയൻ്റ് (diH2O) ശേഖരിക്കുക.
3. ശേഷിക്കുന്ന 800 ട്യൂബുകളിൽ ഓരോന്നിലും കുറഞ്ഞത് 20 μL diH4 പൈപ്പ് ഇടുക. ഇവ നിങ്ങളുടേതായി മാറുംampലെസ്.
4. വ്യത്യസ്ത എസ് സൃഷ്ടിക്കുന്നുampവ്യത്യസ്‌ത അളവിലുള്ള കോൺസൺട്രേറ്റും നേർപ്പിക്കുന്നവയും: ഓരോ സെക്കിലേക്കും സാന്ദ്രീകൃത ചായത്തിൻ്റെ വ്യത്യസ്ത അളവിൽ വിതരണം ചെയ്യാൻ ഡ്രോപ്പർ ഉപയോഗിക്കുകampലെ ട്യൂബ്.
5. നിങ്ങളുടെ ആദ്യ സെക്കൻ്റിൻ്റെ 200 μL പൈപ്പ്amp96 കിണർ പ്ലേറ്റിലെ ഒരു കിണറ്റിലേക്ക് le. ഇത് 3 തവണ കൂടി ആവർത്തിക്കുക, അതിലൂടെ നിങ്ങൾക്ക് അതിൻ്റെ 4 പകർപ്പുകൾ ലഭിക്കുംampപ്ലേറ്റിൻ്റെ 4 കിണറുകളിൽ le. ഏതൊക്കെ കിണറുകളാണ് നിങ്ങൾ സ്ഥാപിച്ചതെന്ന് എഴുതുകample into (നിങ്ങൾ നിങ്ങളുടെ 96 കിണർ പ്ലേറ്റ് ഏതാണെന്ന് അറിയാൻ ആഗ്രഹിക്കുന്ന മറ്റ് വിദ്യാർത്ഥികളുമായി പങ്കിടുംampലെസ് നിങ്ങളുടേതാണ്!).
6. നിങ്ങളുടെ ശേഷിക്കുന്ന 5 സെക്കൻഡിനായി 6, 3 ഘട്ടങ്ങൾ ആവർത്തിക്കുകamples, അതിനാൽ നിങ്ങൾ ഓരോന്നിൻ്റെയും 4 പകർപ്പുകളിൽ അവസാനിക്കുന്നുamp4 കിണറുകളിൽ le. നിങ്ങൾ ഓരോന്നിൻ്റെയും 4 കിണറുകൾ വേണംample, ആകെ 16 കിണറുകൾക്കായി, 96 കിണർ പ്ലേറ്റിൽ നിറഞ്ഞു.
7. 96-കിണർ പ്ലേറ്റിൻ്റെ ആഗിരണം 450 nm-ൽ അളക്കുക.

വിദ്യാർത്ഥി ക്വിസ്
അളവുകളും സ്റ്റാറ്റിസ്റ്റിക്കൽ വിശകലനവും

വിദ്യാർത്ഥി ക്വിസ്

1. ഒരു സ്റ്റാൻഡേർഡ് കർവ് സൃഷ്ടിക്കാൻ സീരിയൽ ഡൈല്യൂഷനുകൾ ഉപയോഗിക്കുന്നതിൻ്റെ പ്രയോജനം എന്താണ്?
2. ജൈവ അളവുകളിൽ കാലിബ്രേഷൻ കർവുകളുടെ ജനറേഷൻ പ്രധാനമായിരിക്കുന്നത് എന്തുകൊണ്ട്?
3. കാലിബ്രേഷൻ കർവുകൾ സൃഷ്ടിക്കുന്നതിൽ ഒരു സാധ്യതയുള്ള വെല്ലുവിളിക്ക് പേര് നൽകുക, ഒരു പരിഹാരം നിർദ്ദേശിക്കുക.
4. ഈ ലാബിൽ ഉപയോഗിക്കുന്ന ഉപകരണങ്ങളുടെ പങ്ക് വിവരിക്കുക.
5. മാനുവൽ പൈപ്പറ്റിംഗിൽ നിന്നുള്ള വ്യതിയാനത്തിൻ്റെ പൊതുവായ ഉറവിടങ്ങൾ ഏതാണ്?
6. ഓരോന്നിൻ്റെയും പകർപ്പുകൾ അളക്കുന്നത് എന്തുകൊണ്ട് ഉപയോഗപ്രദമാണ്ampലെ?
7. എസ് ഇൻ്റർപോളേറ്റ് ചെയ്യുന്നതിൻ്റെ ഉദ്ദേശ്യം എന്താണ്ampഈ പരീക്ഷണത്തിലെ മൂല്യങ്ങൾ?
8. വിവിധ വിഭാഗങ്ങൾക്കിടയിലുള്ള വ്യത്യാസങ്ങൾ വ്യാഖ്യാനിക്കാൻ സ്റ്റാറ്റിസ്റ്റിക്കൽ വിശകലനം എങ്ങനെ സഹായിക്കുംampലെസ്?
9. ഈ ലാബിൽ നിന്നുള്ള കണ്ടെത്തലുകൾ ജൈവ ഗവേഷണത്തിന് എങ്ങനെ പ്രസക്തമാകും?

പ്രമാണങ്ങൾ / വിഭവങ്ങൾ

കാര്യക്ഷമമായ ലാബ് ഓട്ടോമേഷനായി opentrons OT-2 വർക്ക്സ്റ്റേഷനുകൾ [pdf] നിർദ്ദേശങ്ങൾ കാര്യക്ഷമമായ ലാബ് ഓട്ടോമേഷനുള്ള OT-2 വർക്ക് സ്റ്റേഷനുകൾ, OT-2, കാര്യക്ഷമമായ ലാബ് ഓട്ടോമേഷനുള്ള വർക്ക് സ്റ്റേഷനുകൾ, കാര്യക്ഷമമായ ലാബ് ഓട്ടോമേഷൻ, ലാബ് ഓട്ടോമേഷൻ, ഓട്ടോമേഷൻ

റഫറൻസുകൾ

• ഉപയോക്തൃ മാനുവൽ